【檢測】一篇文章吃透水質分析中的微生物檢測項目
2022-10-14 15:23:32 admin
壹
總大腸菌群檢測
1、大腸桿菌、總大腸菌群和糞大腸菌群如何區分？
問題描述：
做海水大腸桿菌的檢測，可是只找到了糞大腸菌群的檢測。三種檢測方法有什么不一樣的？好多文獻大腸桿菌用的就是總大腸菌群的檢測方法，不知對結果會有多少影響？
解答：
三種檢測方法是不一樣的，大腸桿菌不該用總大腸菌群的檢測方法，因為大腸菌群（總大腸菌群）>糞大腸菌群&耐熱大腸菌群>大腸桿菌。
a、總大腸菌群系指一群在37℃培養 24 小時能發酵乳酸、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌；該菌群主要來源于人畜糞便，具有指標菌的一般特征故以此作為糞便污染指標評價飲水的衛生質量。
b、糞大腸菌群：是在胰蛋白胨肉湯中于44.5℃，24h 內產生吲哚的耐熱大腸菌群，因檢測方法比大腸桿菌簡單地多，而受到重視；用提高培養溫度的方法將自然環境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區分開，在44.5℃仍能生長的大腸菌群，稱為糞大腸菌群。是水體受人畜糞便污染的比較直接指標。
c、大腸桿菌：細菌門。細胞桿狀，直徑約1微米，長約2微米，兩端鈍圓，周身具鞭毛，可運動。
革蘭氏染色陰性，不形成芽孢。菌落圓形，白色或黃白色，光滑而具閃光，低平或微凸起，邊緣整齊。最適條件下培養20分鐘可繁殖1 代。
大腸桿菌是人和溫血動物腸道內普遍存在的細菌，是糞便中的主要菌種。一般生活在人大腸中并不致病，可能在腸中對合成維生素 K 起作用。
但它侵入人體一些部位時，可引起感染，如腹膜炎、膽囊炎、膀胱炎及腹瀉等。人在感染大腸桿菌后的癥狀為胃痛、嘔吐、腹瀉和發熱。
感染可能是致命性的，尤其是對孩子及老人。大腸桿菌的檢驗是以無菌操作取25g樣品，放入裝有225mL稀釋劑的滅菌均質杯內，于 8000r/min 均質1～2min,制成1:10樣品勻液(也可用滅菌乳缽研磨的方法代替)。
稀釋樣品勻液根據對樣品污染情況的估計，用稀釋劑將樣品勻液制成一系列十倍遞增的樣品稀釋液，從制備樣品勻液至稀釋完畢，全過程不得超過15minLST和EC初步篩選：對每個樣品選擇適宜的三個連續稀釋度的樣品稀釋液。
每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白(LST)肉湯,每管接種 1mL。將接種管置于36±1℃培養48±2h；觀察試管的產氣情況：檢查倒管內是否有氣泡產生,用直徑為3mm 的接種環將所有48±2h 內產氣的LST肉湯管培養物移種于EC肉湯管中；將所有接種的EC肉湯管在30min內放入帶蓋44.5±0.5℃水浴箱內培養48±2h。
2、檢測總大腸菌群過程中，倒管操作的疑惑
問題描述：
第一步，乳糖發酵試驗的時候，在開始培養的時候，小試管里面我感覺是一小試管的氣，到底是液體還是氣體啊？
解答：
a、放小倒管，目的是看培養后它是否產生氣體。小倒管放進去要沒有氣泡，一開始放進去就有氣泡不行的。可以先放小倒管，在加培養基。
你可以自己試驗下，看自己操作哪種方式容易操作不會有氣泡。小導管要清洗干凈。小導管先加后加問題不大才對，滅菌以后小導管里面的空氣可以排盡。這個過程，先放后放（放完里面有氣泡）去滅菌完，看下效果。
b、倒管里面有氣主要還是你滅菌的時候沒有控制好，跟先倒培養基或者先放小倒管沒有關系，注意在滅菌時候，時間到了不著急放氣，等溫度和壓力自然降下來再取，另外就是滅菌的時候試管傾斜一定角度放滅菌鍋里也有助于排氣。
3、如何選擇糞大腸菌群 MPN 法和濾膜法，以及兩者的單位是否能轉換？
問題描述：
按照 HJ/T347，糞大腸菌群有兩種監測方法，一種是 MPN 發，一種是濾膜法，現在碰到幾個問題比較困惑，想請教一下：
a、MPN 法的單位是沒有單位呢，還是MPN/L呢？
b、包括 GB 3838 還是 GB/T 14848 等標準，反正是我看到過的所有對糞大腸菌群有限值要求的標準，都是以個/L 做單位的，是不是就只能用濾膜法了？或者 MPN 法也可以呢？
c、根據地表水環境質量標準值中，糞大腸菌群的單位是“個/L”,但是多管發酵的最后單位是 “MPN/100mL”及時最后計算是把 MPN/100mL 轉化為"MPN/L"，那我在做最后的評價中，我要如何把 MPN/L,和“個/L”進行評價。還是說，地表水的檢測方法只能用濾膜法而不能用多管發酵法。
解答：
a、濾膜法、多管發酵法及酶底物法這 3 者之間檢測總大腸菌群不具有可比性。濾膜法檢測的是準確值，多管發酵法及酶底物法出具的是估計值。三者的檢測原理不同，接種取樣的量也不同。故 3 者之間不能相互轉換或比對。
b、酶底物法單位是 MPN/100mL，濾膜法是用個/L。MPN 法的檢出限 2MPN/100mL 不能簡單等同于 20 個/L，否則按個/L 計的檢出限將大于 GB5749 標準的限值，這是不合邏輯的。但檢測結果中，可以用 MPN/100ml 乘以 10 便轉化為“個/L”。
貳
其他
1、生化培養箱和電熱培養箱有什么區別？
問題描述：
科里上周買了一臺培養箱，當儀器管理員打開后才發現，里面是電熱培養箱，但我們的采購單上寫的是生化培養箱，這兩者有什么區別嗎？我們退貨的時候理由是電熱培養箱是培養細菌的，生化培養箱是培養五日的。是這么回事嗎？
單位只有三個培養箱，因為有時候微生物需要不同的培養溫度，所以三個培養箱都在用， BOD培養也在用。今天內部檢查，說使用記錄上不能體現微生物培養和BOD培養混用培養箱。微生物要么不寫，要么寫在同一個培養箱的使用記錄上。
就算混用違規，難道體現違規比體現作假的后果更嚴重嗎？微生物整個分析過程就一個培養使用記錄，沒有培養記錄，那數據怎么出來？各位老師，有相關資料表明這兩種情況不能混用培養箱嗎？
解答：
生化培養箱有制冷功能，電熱培養箱沒有制冷功能，當環境溫度高于培養箱內的工作溫度時，生化培養箱仍然能夠保持它的工作溫度，而電熱培養箱的熱由于環境溫度過高而散不出去，所以就會出現頻繁的報警。
a、兩者工作原理不同，生化培養箱主機部分是壓縮機的可制熱和制冷（和空調一樣），可工作在室溫上或室溫以下。電熱培養箱靠電熱絲加溫，只能工作在室溫以上。
b、《評審準則》是這樣規定的：
依據相關的規范、方法和程序要求，當影響檢驗檢測結果質量情況時，應監測、控制和記錄環境條件。對諸如生物消毒、灰塵、電磁干擾、輻射、濕度、供電、溫度、聲級和振級等應予重視，使其適應于相關的技術活動要求。當環境條件危及到檢驗檢測的結果時，應停止檢驗檢測活動。
檢驗檢測機構應對影響檢驗檢測質量的區域的進入和使用加以控制，可根據其特定情況確定控制的范圍。
應將不相容活動的相鄰區域進行有效隔離，采取措施以防止交叉污染。應采取措施確保實驗室的良好內務，必要時應建立和保持相關的程序。
因此評審時有老師就要求微生物和 BOD 的培養箱和壓力鍋必須分開，如果你要不分開就得舉證，通過檢測空白菌落的方法來證明合用沒有影響來說服老師。
不過要是用 BOD 培養箱來做細菌培養的話，還真的不可以，因為 BOD 培養箱的控溫精度是 1℃，不能滿足糞大腸菌群發酵 0.5℃的培養控溫精度要求。另外，溫度顯示的分辨率（最小讀數單位）不等于控溫的準確度（溫度誤差），這個指標要看培養箱說明書和銘牌上的溫度誤差和溫度均勻性指標。
2、水廠化驗室建無菌室需要哪些儀器設備？
問題描述：
主要做大腸菌群的日處理 6～7 個樣品，也不是很多。就是普通污水廠化驗室建無菌室需要用到的設備就行了。申請環境監測業務建設微生物室，做細菌，大腸桿菌，糞大腸菌，需要購買哪些儀器和器皿？
解答：
化驗室只測大腸菌群的話，不用很多設備，要求也不必太嚴，但是房間要是套間，外面是緩沖間，十萬級菌檢室需帶更衣間。
無菌區要安裝紫外滅菌燈，儀器設備要有電熱恒溫培養箱、隔水式恒溫培養箱，高壓滅菌鍋可以放在其他房間。
其他的設備有顯微鏡,無菌操作臺,低功率紫外燈，pH 計，培養基，培養皿，溫度計，可凈化空調，潔凈操作臺，水浴鍋，潔凈服，鑷子，有關試管等。
3、如何做好微生物檢測的環境控制？
問題描述：
不知道各位檢測微生物的版友們怎么做微生物檢測室的質控，我們好像是在檢測室的四角放培養皿，然后進行培養，有沒有類似的？正確的操作應該是怎么做呢？
解答：
a、概述
無菌室的菌落空白的多少關系細菌指標的檢測質量。通常無菌室是在微生物實驗室內專辟一個小房間，可以用塑料板材、玻璃或復合材料整體建造。面積不宜過大，約 4～6 平方米即可，高2.7米左右，不得有窗（傳遞窗除外）和容易積塵的物件。
無菌室外要設一個緩沖間，無菌室和緩沖間都必須密閉。室內必須有超凈工作臺。超凈工作臺其主要功能是利用空氣層流裝置排除工作臺面上部包括微生物在內的各種微小塵埃。通過電動裝置使空氣通過高效過濾器具后進入工作臺面，使臺面始終保持在流動無菌空氣的控制之下。
b、技術要求
空白值平均菌落數：100 級潔凈區平板雜菌數平均不得超過 1 個菌落，10000 級潔凈室平均不得超過 3 個菌落。
c、檢驗條件
1）檢驗時環境條件
1.1 供電電源：220V±22V,50±1Hz
1.2 環境溫度（10～30）±2℃
1.3 環境濕度：≤85％
2）檢驗用的設備：SW—CJ 型超凈工作臺，DH4OOOB-電熱恒溫培養箱。
d、檢驗項目和檢驗方法
1）項目：平均菌落數
2）方法
2.1 打開紫外燈輻照滅菌 30 分鐘以上，并同時打開超凈臺進行吹風。操作完畢，應及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌 20 分鐘。
2.2 在超凈工作臺開啟的狀態下，取內徑 90mm 的無菌培養皿若干，無菌操作分別
注入融化并冷卻至約 45℃的營養瓊脂培養基約 15mL，放至凝固后，倒置于 30～35℃培養箱培養 48 小時，證明無菌后，取平板 3～5 個，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露 30
分鐘后，倒置于 30～35℃培養箱培養 48 小時，取出檢查并記錄。
2.3 所有平皿菌落數的均值即為平均菌落數，應該滿足上面的技術要求，如不滿足要求應對無菌室進行徹底消毒，重復檢查，直到滿足上面的技術要求為止。
e、檢驗結果處理及周期
1）檢驗記錄表中各項技術指標滿足要求，準許使用；不滿足的，不得使用。
2）檢驗周期不超過 6 個月。
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