二磺酸酚光度法適合檢測飲用水、地下水和清潔地表水等，這類水質相對干凈的硝酸鹽氮含量。其檢測原理是硝酸鹽在無水的情況下與酚二磺酸反應，生成硝基二磺酸酚，在堿性溶液中生成黃色化合物，然后進行測定。不過需要注意的是水中含有的氯化物、亞硝酸鹽、銨鹽、有機物和碳酸鹽會對檢測結果造成干擾，因此要對其進行適當的預處理。

二磺酸酚光度法所需儀器及試劑

1.分光光度計
2.瓷蒸發皿
3.發煙硫酸
4.濃硫酸
5.酚二磺酸
稱取25g苯酚置于500mL錐形瓶中,加150mL濃硫酸使之溶解,再加75mL發煙硫酸(含13%三氧化硫),充分混合。瓶口插小漏斗,小心置瓶于沸水浴中加熱2h,得淡棕色稠液,貯于棕色瓶中,密塞保存。
6.氨水
7.硝酸鹽標準貯備液
稱取0.7218g經105-110℃干燥2h的優級純硝酸鉀溶于三級試劑水，移入1000mL容量瓶中，稀釋至標線，加2mL三氯甲烷作保存劑，混勻后至少可穩定6個月。
8.硝酸鹽標準使用液
吸取50.0mL硝酸鹽標準貯備液置蒸發皿內,加0.1mol/L氫氧化鈉溶液使調至pH=8,在水浴上蒸發至干。加2mL酚二磺酸,用玻璃棒研磨蒸發皿內壁,使殘渣與試劑充分接觸,放置片刻,重復研磨一次,放置10min,加入少量三級試劑水,移入500mL容量瓶中,稀釋至標線,混勻。貯于棕色瓶中,此溶液至少穩定6個月。
9.硫酸銀溶液
稱取4.397g硫酸銀溶于三級試劑水,移至1000mL容量瓶中,用三級試劑水稀釋至標線。1.00mL此溶液可去除1.00mg氯離子(C1-)。
10.氫氧化鋁懸浮液
溶解125g硫酸鋁鉀或硫酸鋁銨于1000mL三級試劑水中,加熱至60℃,在不斷攪拌下,徐徐加入55mL濃氨水,放置約1h后,移1000nL量筒內,用三級試劑水反復洗滌沉淀,最后至洗滌液中不含硝酸鹽為止。澄清后,把上清液盡量全部傾出,只留稠的懸浮物,最后加入100mL三級試劑水,使用前應振蕩均勻。
11.高錳酸鉀溶液
稱取3.16g高錳酸鉀溶于三級試劑水,稀釋至1L。

硝酸鹽氮檢測步驟

1.校準曲線的繪制

于一組50mL比色管中,分別硝酸鹽氮標準溶液配制表給的標準溶液量用分度吸管分別加入硝酸鹽氮標準使用液,加三級試劑水至約40mL。加3mL氨水使成堿性稀釋至標線,混勻。在波長410nm處,以三級試劑水為參比,符合下圖硝酸鹽氮標準使用溶液1的用30mm比色皿測量吸光度,硝酸鹽氮標準使用溶液2的用10mm比色皿測量吸光度。由測得的吸光度值減去零濃度管的吸光度值,分別繪制不同比色皿光程長的吸光度對硝酸鹽氮含量(mg)的校準曲線。

2.水樣預處理

（1）水樣渾濁帶顏色
可取100mL水樣與具塞比色管中，加入2mL氫氧化鋁懸浮液，密塞震搖，靜置數分鐘后，過濾棄去20mL初濾液。
（2）去除水中氯離子
取100mL水樣移入具塞比色管中,根據已測定的氯離子含量,加入相當量的硫酸銀溶液,充分混合。在暗處放置0.5h,使氯化銀沉淀凝聚然后用慢速濾紙過濾,棄去20mL初濾液。
3.水樣測定
取50.0mL經預處理的水樣于蒸發皿中,用pH試紙檢查,必要時用0.5mol/L硫酸或0.1mol/L氫氧化鈉溶液調至約pH=8,置水浴上蒸發至干。加1.omL酚二磺酸,用玻璃棒研磨,使試劑與蒸發皿內殘渣充分接觸,靜置片刻,再研磨一次,放置10min,加入約10mL三級試劑水。在攪拌下加入3-4mL氨水,使溶液呈現最深的顏色。如有沉淀,則過濾。將溶液移入50mL比色管中,稀釋至標線,混勻。于波長410nm處,根據硝酸鹽氮含量選用10mm或30mm比色皿,以三級試劑水為參比,測量吸光度。同時以三級試劑水代替水樣,按相同步驟進行空白實驗。然后通過公式算出水樣中硝酸鹽氮的含量。

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