其方法原理是將一定量樣品用濾膜過濾截留藻類,研磨破碎藻類細(xì)胞,用丙酮溶液提取葉綠素,離心分離后分別于750nm、664nm、647nm和630nm波長處測定提取液吸光度,根據(jù)公式計算水中葉綠素a的濃度。
1 丙酮。
2 碳酸鎂。
3 丙酮溶液:9+1。
在900ml丙酮中加入100ml實驗用水。
4 碳酸鎂懸濁液。
稱取1.0g碳酸鎂,加入100ml實驗用水,攪拌成懸濁液(使用前充分搖勻)。
5 玻璃纖維濾膜:直徑47mm,孔徑為0.45um-0.7um。
1 采樣瓶:1L或500ml具磨口塞的棕色玻璃瓶。
2 過濾裝置:配真空泵和玻璃砂芯過濾裝置。
3 研磨裝置:玻璃研缽或其他組織研磨器。
4 離心機(jī):相對離心力可達(dá)到1000×g(轉(zhuǎn)速3000r/min~4000r/min)。
5 玻璃刻度離心管:15ml,旋蓋材質(zhì)不與丙酮反應(yīng)。
6 可見分光光度計:配10mm石英比色皿。
7 針式濾器:0.45um聚四氟乙烯有機(jī)相針式濾器。
8 一般實驗室常用儀器和設(shè)備。
水樣的采集一般使用有機(jī)玻璃采水器或其他適當(dāng)?shù)牟蓸悠鞑杉嫦?.5m水樣,湖泊、水庫根據(jù)需要可進(jìn)行分層采樣或混合采樣,采樣體積為1L或500ml。如果水樣中含沉降性固體(如泥沙等),
應(yīng)將水樣搖勻后倒入2L量筒,避光靜置30min,取水面下5cm水樣,轉(zhuǎn)移至采樣瓶。在每升水樣中加入1ml碳酸鎂懸濁液,以防止酸化引起色素溶解。
水樣采集后應(yīng)在0℃-4℃避光保存、運輸,24h內(nèi)運送至檢測實驗室過濾(若水樣24h內(nèi)不能送達(dá)檢測實驗室,應(yīng)現(xiàn)場過濾,濾膜避光冷凍運輸),水樣濾膜于-20℃避光保存,14d內(nèi)分析完畢。
在過濾裝置上裝好玻璃纖維濾膜。根據(jù)水體的營養(yǎng)狀態(tài)確定取樣體積,具體可以參考過濾水樣體積,用量筒量取一定體積的混勻水樣,進(jìn)行過濾,最后用少量蒸餾水沖洗濾器壁。過濾時負(fù)壓不超過50kPa,在水樣剛剛完全通過濾膜時結(jié)束抽濾,用鑷子將濾膜取出,將有水樣的一面對折,用濾紙吸干濾膜水分。
將樣品濾膜放置于研磨裝置中,加入3ml-4ml丙酮溶液,研磨至糊狀。補(bǔ)加3ml-4ml丙酮溶液,繼續(xù)研磨,并重復(fù)1-2次,保證充分研磨5min以上。將完全破碎后的細(xì)胞提取液轉(zhuǎn)移至玻璃刻度離心管中,用丙酮溶液沖洗研缽及研磨杵,一并轉(zhuǎn)入離心管中,定容至10ml。
將離心管中的研磨提取液充分振蕩混勻后,用鋁箔包好,放置于4℃避光浸泡提取2h以上,不超過24h。在浸泡過程中要顛倒搖勻2-3 次。
將離心管放入離心機(jī),以相對離心力1000×g(轉(zhuǎn)速 3000 r/min~4000 r/min)離心10min。然后用針式濾器過濾上清液得到葉綠素a的丙酮提取液(試樣)待測。
水樣測定
將試樣移至比色皿中,以丙酮溶液為參比溶液,于波長750nm、664nm、647nm、630nm處測量吸光度。750nm波長處的吸光度應(yīng)小于0.005,否則需重新用針式濾器過濾后測定。
最后水樣中葉綠素a的質(zhì)量濃度可以按照相應(yīng)公式進(jìn)行計算得出。
以上內(nèi)容來自于《HJ 897-2017 水質(zhì) 葉綠素a的測定 分光光度法》